发光细菌的急性毒性试验

    添加日期:2017年10月17日 阅读:4338

    发光细菌作为毒性检测的生物学方法,因其简便、快速、灵敏且成本较低而日益受到重视。本试验项目推荐两个方法。一为国家环境保护局于1995年发布的发光细菌法(GB/T15441-1995),采用的是海洋发光细菌菌种;二为淡水发光菌法,采用的是淡水型发光菌种。

    明亮发光杆菌T3法(A)

    本方法适用工业废水、纳污水体及实验室条件下,可溶性化学物质的水质急性毒性监测。

    1.原理

    基于发光细菌相对发光度与水样毒性组分总浓度呈显著负相关(P≤0.05),因而可通过生物发光光度计测定水样的相对发光度,以此表示其急性水平。

    水质急性毒性水平可按选用相当的参比物氯化汞浓度(以mg/L为单位)来表征,或选用EC50值(半数有效浓度,以样品液百分浓度为单位)来表征。

    2.样品的采集与保存

    ①采样瓶使用聚四氟乙烯衬垫的玻璃瓶,务必清洁、干燥。采集水样时,瓶内应充满水样不留空气。采样后,用塑胶带将瓶口密封。

    ②毒性测定应在采样后6h内进行。否则应在2-5℃下保存样品,但不得超过24h。报告中应写明水样采集时间和测定时间。

    ③对于含固体悬浮物的样品须离心或过滤去除,以免干扰测定。

    3.仪器设备

    ①生物发光光度计:配置2ml或5ml测试管。

    当氯化汞标准溶液浓度为0.10mg/L时,发光细菌的相对发光度为50%,其误差不超过±10%。

    ②2ml或5ml测试样品管(具标准磨口塞,为制造比色管的玻璃料制作,由专业玻璃仪器厂制造),分别适用于相应型号的生物发光光度计。

    ③微量注射器:10μl。

    ④注射器:lml。

    ⑤定量加液瓶:5ml。

    ⑥吸管:2ml、10m1、25ml。

    ⑦试剂瓶:l00ml。

    ⑧量筒:100ml,500ml。

    ⑨棕色容量瓶:50ml、250ml、1000ml。

    ⑩半微量滴定管(配磨口试液瓶,全套仪器均为棕色):l0ml。

    4.试剂和材料

    除另有说明外,本方法所用试剂均应为符合国家标准的分析纯试剂、蒸馏水或同等纯度的水。

    ①氯化汞HgCl2。

    ②氯化钠NaCl,化学纯。

    ③明亮发光杆菌T3小种(PhotobacteriumphosphoreumT3spp.)冻干粉,安瓶瓶包装,每瓶0.5g,在2-5℃冰箱内有效保存期为6个月。新制备的发光细菌休眠细胞(冻干粉)密度不低于每克800万个细胞;当按5(3)④步骤将冻干粉复苏2min后即发光(可在暗室内检验,肉眼应见微光),稀释成工作液后每毫升菌液不低于1.6万个细胞((5ml测试管)或2万个细胞(2ml测试管)(均为稀释平板法测定)。在生物发光光度计上测出的初始发光量应在600-1900mV之间,低于600mV允许将倍率调至“×2”档,高于1900mV允许将倍率调整至“×0.5”档。仍达不到标准者,更换冻干粉。

    ④氯化钠溶液,3g/100m1:氯化钠3g于玻璃容器内,用量筒加蒸馏水l00ml。

    ⑤氯化钠溶液,2g/l00ml氯化钠2g,加蒸馏水l00ml于试剂瓶内,2-5℃保存。

    ⑥参比物氯化汞标准溶液:0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.12、0.14、0.18、0.20、0.22、0.24mg/L。

    ⑦氯化汞母液,ρ=2000mg/L:1/万分析天平精称密封保存良好的无结晶水氯化汞0.1000g于50ml容量瓶中,用3g/100m1氯化钠溶液稀释至刻度,置2-5℃冰箱备用,保存期6个月。

    ⑧氯化汞工作液,ρ=2mg/L:用移液管吸氯化汞2000mg/L母液l0ml于l000ml容量瓶中,用3g/l00ml氯化钠溶液定容。再用移液管吸取氯化汞20mg/L液25ml于250m1容量瓶中,用3g/l00m]氯化钠溶液定容。将此液倒入配有半微量滴定管的试液瓶,然后用3g/l00ml氯化钠溶液将氯化汞2mg/L溶液按表5-3-6稀释成系列浓度(一律采用50ml容量瓶)。氯化汞工作液保存期不能超过24h,超过者务必重配。


    责任编辑:赵帅超 WWW.1168.TV 2017-10-17 16:16:17

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